Identyfikacja pozwalająca odróżnić żywe osobniki węgorka sosnowca od martwych jest szczególnie ważna podczas rutynowej granicznej kontroli fitosanitarnej drewna i opakowań drewnianych wwożonych na teren Unii Europejskiej. Jeżeli w drewnie, po skutecznie prze­prowadzonym zabiegu termicznym pozostają martwe osobniki nicieni, analiza molekularna oparta na DNA może dać fałszywe wyniki pozytywne. Lepszym rozwiązaniem jest przeprowadzenie analizy na podstawie obecności RNA nicieni, ponieważ ulega ono szybkiemu rozkładowi po ich śmierci. Badania przeprowadzano z wykorzystaniem techniki RT-PCR, obejmującej odwrotną transkrypcję RNA do cDNA, a następnie amplifikację za pomocą reakcji PCR. Wyniki wykonanych analiz wykazały obecność RNA węgorka sosnowca zarównow osobnikach żywych, jak i martwych, w których RNA utrzymywało się jeszcze przez kilka dni po zabiegu (do 5 dni po obróbce termicznej). Podczas tej samej reakcji PCR, otrzymywano również produkty dla DNA Bursaphelenchus xylophilus o innej długości, co w łatwy sposób umożliwiło odróżnienie RNA od DNA tego gatunku nicienia. Dodatkowo, przeprowadzona analiza molekularna nicieni wprowadzonych do krążków drewna, poddanych obróbce termicznej, a następnie wyekstrahowanych z nich nicieni, potwierdziła prawidłowość przepro­wadzonego zabiegu, gdyż w żadnym przypadku nie wykrywano nicieni.

Identification, allowing the distinction between live and dead PWN individuals, is particularly important during routine border phytos­anitary inspections of wood and wooden packaging imported into the European Union. If dead nematodes remain in the wood after suc­cessful thermal treatment, DNA-based molecular analysis may yield false positive results. A better approach is to analyze the presence of nematode RNA, as it degrades rapidly after their death. The study was carried out using an RT-PCR assay, involving reverse transcription of RNA into cDNA and subsequent PCR amplification. The results of the analyses demonstrated the presence of PWN RNA in both live and dead individuals, in which the RNA persisted for several days after treatment (up to 5 days after heat treated). During the same PCR reaction, Bursaphelenchus xylophilus DNA products of different lengths were also obtained, easily distinguishing RNA from DNA. Addi­tionally, the molecular analysis of nematodes introduced into the heat treated wood discs and then extracted from them confirmed the correctness of the procedure, as no nematodes were detected in any case.

Arbuzova E.N., Karagyan G.H., Kozyreva N.I., Shchukovskaya A.G., Ghrejyan T.L., Kalashian M.Y., Akopyan K.V. 2025. First finding of Bursaphelenchus xylophilus in pine plantations of the Republic of Armenia. Journal of Nematology 57 (1): 20250004. DOI: 10.2478/jofnem-2025-0004

Bergdahl D.R. 1988. Impact of pinewood nematode in North America: present and future. Journal of Nematology 20 (2): 260–265.

FAO IPPC 2018. Regulation of wood packaging material in international trade. ISPM 15. Annex 1. Rzym, s. 34.

Leal I., Allen E., Foord B., Anema J., Reisle C., Uzunovic A., Varga A., James D. 2015. Detection of living Bursaphelenchus xylophilus in wood, using reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP). Forest Pathology 45 (2): 134–148. DOI: 10.1111/efp.12149

Leal I., Foord B., Allen E., Campion C., Rott M., Green M. 2013. Development of two reverse transcription-PCR methods to detect living pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, in wood. Forest Pathology 43 (2): 104–114. DOI: 10.1111/efp.12003

Mamiya Y. 2004. Pine wilt disease in Japan. s. 9–20. W: The pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus (M. Mota, P. Vieira, red.). Proceedings of an International Workshop, University of Évora, Portugal, 20–22 August 2001. Nematology Monographs and Perspectives, Volume 1. Leiden, The Netherlands, E. J. Brill, 291 ss.

Mota M.M., Braasch H., Bravo M.A., Penas A.C., Burgermeister W., Metge K., Sousa E. 1999. First report of Bursaphelenchus xylophilus in Portugal and in Europe. Nematology 1 (7): 727–734. DOI: 10.1163/156854199508757

NPPO 2025. One outbreak detected in Seignosse (Landes departement, Nouvelle Aquitaine region) (2025-11-04).

Robertson L., Cobacho Arcos S., Escuer M., Santiago Merino R., Esparrago G., Abelleira A., Navas A. 2011. Incidence of the pine­wood nematode Bursaphelenchus xylophilus Steiner & Buhrer, 1934 (Nickle, 1970) in Spain. Nematology 13 (6): 755–757. DOI: 10.1163/138855411X578888